小反芻獸疫病毒檢測試劑盒的檢驗方法主要包括病毒分離培養和鑒定、聚合酶鏈式反應（PCR）、熒光定量PCR、抗體ELISA檢測、瓊脂凝膠免疫擴散試驗以及膠體金試劑卡檢測。
1.病毒分離培養和鑒定
病毒分離：采集病料如眼瞼下結膜分泌物、鼻腔分泌物、頰部、直腸黏膜拭子等，接種至羊腎原代細胞或VERO細胞中培養。
病毒培養：將處理過的樣品接種到已形成良好單層的細胞中，置于37℃吸附1小時，傾去接種液，加入維持液后繼續培養，逐日觀察細胞變化。
病毒鑒定：通過觀察細胞病變情況，如細胞變圓、集合等現象，結合病毒中和試驗進行陽性判定。
2.聚合酶鏈式反應（PCR）
引物設計：使用特定的上下游引物進行PCR擴增。
擴增程序：經過一系列溫度循環后，通過電泳分析PCR產物，若在特定位置出現特異性擴增條帶則判為陽性。
3.熒光定量PCR
引物和探針：使用特異性引物和熒光探針。
結果判定：根據擴增曲線和Ct值判斷樣品是否為PPRV陽性。
4.抗體ELISA檢測
原理：采用阻斷ELISA方法原理進行檢測。
操作：嚴格按照商品說明書操作和判斷結果。
5.瓊脂凝膠免疫擴散試驗
操作步驟：取血清樣品與標準血清、抗原分別加入瓊脂板的孔中，靜置后移入濕盒內室溫反應。
結果判定：根據沉淀線的出現與否及其與陽性對照的關系判斷結果。
6.膠體金試劑卡檢測
操作方法：使用商品化的膠體金試劑卡，按照說明書進行操作和判斷。
更新時間：2025-01-14
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